هدف اختراع حاضر، ايجاد مولكولهاي موتانت استرپتوكيناز از طريق ايجاد موتاسيون در ژنskc) S.equisimilis group C, SKC9542 (ژن استخراج شده و استاندارد جهت توليد استرپتوكيناز نوتركيب دارويي) به منظور افزايش فعاليت با استفاده از تكنيكهاي مهندسي ژنتيك و بيوتكنولوژي مي باشد. مولكولهاي موتانت بدست آمده از اختراع حاضر مي تواند به عنوان جايگزيني از skc در توليد داروي نوتركيب جهت درمان اختلالات ناشي از ترومبوز از جمله سكته قبلي، آمبولي ريوي، ترومبوز عميق عروق خوني بكار برده شود

خلاصه: ‏استرپتوكيناز پروتئين ترشحي است كه توسط گروههاي A،C‏ وG استرپتوكوك هاي بتاهموليتيك توليد شده و نوع نوتركيب آن سالهاست به عنوان داروي ترومبوليتيك در درمان اختلالات قلبي - عروقي بكار برده مي شود. اكثر مطالعات تاكنون بر روي ژن skc ‏استخراج شده از سويه GRPUP C STREPTOCOCCI ATCC 9542 ‏انجام شده است. در تحقيق حاضر از بين سويه هايي گروه c ‏و G ‏جمع آوري شده از ايران، بر اساس ميزان فعاليت استرپتوكيناز توليدي در تست كازئوليز و مقايسه آن با سويه استاندارد 9542 ATCC ‏، سويه اي متعلق به گروه G انتخاب شد و ژن استخراج شده پس از تعيين توالي، كلون و بيان گرديد و مشخص شد اين سويه هاراي جهش هاي طبيعي در موقعيت هاي بسيار مهم دخيل در فعاليت آنزيمي مي باشد. از جمله موقعيت ۴٧ ‏و ٢۵٣ ‏كه هر دو در شناسايي و تشكيل كمپلكس با پلاسمينوژن انساني نقش دارند و تغيير اسيد آمينه ١٣٨ ‏كه در مطالعات قبلي به عنوان آنتي ژن شناخته شده است. به نظر مي رسد ژن اين سويه خاص قابليت هاي مناسبي در جهت توليد استرپتوكيناز نوتركيب با خصوصيات بهتري نسبت به ژن قبلي دارا مي باشد.

ابتدا باكتري S.equisimilisگروه G شناسايي شده است كه تا كنون گزارشي مبني بر حضور يا استخراج آنزيم HAS اعلام نشده است. براساس سكانس DNA كدكننده آنزيم HAS از باكتريG88 S. equisimilis و با ستفاده از نرم افزارهاي پيش‌بيني كننده موقعيت پروتئين در سلول نظير TMHMM Server v. 2.0 موقعيت پروتئين has در سلول شبيه ‌سازي ‌شده و موقعيت آمينواسيدهاي ابتدا و انتها دمينها از جمله دمين درون‌سلولي جهت طراحي آغازگرها به دست آمد و با نرم‌افزار GeneRunner V6.1 آغاز‌گر‌ها شناسايي شدند. سپس فرمهاي كوتاه شده و كامل آنزيم به وسيله PCR تكثير، كلون و توالي¬يابي شد. پس از آن به باكتري E.coli انتقال يافته و بيان آنزيم ها انجام شد. پس از تخليص و تاييد از غشا سلولي، كارايي آنزيمها به¬صورت جداگانه و همچنين آنزيم كامل براي توليد HA مورد بررسي قرار گرفته و نشان داده شده است كه كليه فرمهاي كوتاه شده داراي فعاليت آنزيمي مي باشند هر چند نسبت به فرم كوتاه كاهش فعاليت وجود دارد. همچنين مشخص شد كه دمين درون سلولي اين آنزيم بخش فعال آن در توليد HA بوده بدون نياز به سلول و در شرايط In vitro و بدون وابسته بدون به غشا سلولي مي¬تواند در حضور سوبستراي اوليه و ايجاد شرايط بافري مناسب HA فرايندهاي اتصال به مونوساكاريدي و پليمريزاسيون آنها را انجام دهد اين اولين گزارش در مورد توليد In vitro با استفاده از كوتاه ترين فرم آنزيم هاي پليمريزه كننده HA جهت بيوسنتز اين بيوپليمر ارزشمند مي باشد. همچنين ساير فرمهاي كوتاه شده با حذف دمين هاي غشايي داراي فعاليت مي باشند كه فعاليت فرمهاي HAS23, HAS2, HAS3 اين امكان را براي توليد فرمهاي تثبيت شده اين اشكال در سطح ليپوزوم و اتصال يك طرفه و يا دوگانه دمين هاي غشايي و بررسي كارايي سيستم هاي قابل بازيابي جهت توليد يكنواخت و طولاني مدت و به صرفه اقتصادي را فراهم خواهد آورد.